專家技術經驗交流區．幹細胞的製造工藝

我們談到幹細胞，無可避免的一定要談到幹細胞的製作流程，一般主流的幹細胞來源都是以臍帶為主，今天就給大家聊聊臍帶間充質幹細胞的基本流程，包括了供體的確定和幹細胞的製備工藝。

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儲存臍帶幹細胞的前置作業有哪些？
首先，供體的確定，主要的是選擇產婦和胎兒兩部份，產婦的部份是牽涉到產婦的篩選，一般來說，希望產婦年齡低於38週歲，無家族遺傳病史、無惡性腫瘤及代謝疾病，在懷孕期間各項的檢驗數據都是正常的，有關的病原微生物血清學檢查，包括A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎，EBV、CMV、HIV和TP，梅毒帶原者、肝臟的轉氨酶高者、各種結核病患者、吸毒史者、同性戀者、多個性伴侶者等高危人群。對於胎兒的部份，則有以下要求，包括活胎、足月、無畸型和各項生理指標符合懷孕週期的標準。

擇臍帶幹細胞要如何提取與儲存呢？
接下來就是細胞的製備工藝流程，包括了組織的採集，細胞分離、細胞凍存和細胞製劑。臍帶接收後，必須要預處理，包括了生理鹽水的沖洗和雙抗浸泡，然後去除血管，去除包膜，將組織分離成適當大小，置入無菌EP管內，充分剪碎，利用無血清培養基進行原代培養，培養約兩週，進行傳代培養P0～P1，再經歷3～4天，再一次傳代培養P1～P2，之後凍存於細胞庫。每一次的傳代後都必須過形態觀察，存活率檢檢測、細真菌檢、支原體檢測、內毒素檢測、細胞表型檢測。凍存到細胞庫之前也必須做細胞內核型分析、種屬鑒別、STR分析、生長曲線、群體倍增時間、細胞周期、分化潛能、免疫學反應、致瘤實驗、端粒酶活性檢測。

接下來就是對於臍帶間充質幹細胞的鑒定，主要有細胞形態學、細胞表面標誌物、細胞成脂誘首分化、細胞成股誘導分化、細胞成軟骨誘導分化。細胞形態學是從培養箱中取出培養了3天原代細胞和傳代2～3天的P1幹細胞，在顯微鏡下進行大體的觀察、初步判斷有無污染、細胞形態是否正常。如果正常則再用高倍鏡對細胞的大小、形態、胞漿透明度、細胞核及核仁、胞漿中是否有異常顆粒進行判斷。如果沒有問題，則再次確認相關細胞結構有無問題，然後再拍照存檔。如果有污染發生，應即移除培養室並做好登記，註明污染類型信息，查找原因。

除了代數培養外，我們也要對細胞的表面標誌物進行檢測，將處於對數生長期的臍帶間充質幹細胞進行胰酶消化，調整細胞濃度後對不同的組別包括陰性對照組、同型對照組還有試驗組進行處理，最後用流式細胞儀檢測各標誌物的表達百分比。同時為了檢測臍帶間充質幹細胞的均一性、純度、穩定性和存活率、細胞群體倍增時間、細胞周期分析、細胞核型分析，細胞端粒酶活性檢測、有效性、安全性、無菌試驗、支原體檢測、細胞內外源致病因子檢測、內毒素檢測、體外成瘤試驗及體內成瘤試驗，都須要花大量的時間才能將一個幹細胞完整安全的製作出來。

臍帶間充質幹細胞做為抗衰老的主要治療手段，已經進人一個快速增長的時期，主要是因為經濟發達、知識和教育的普及和快速傳播，人們對這項治療已經是耳熟能詳，加上普遍的人均夀命的延長，讓大家對於健康的老化有了更高的期望，因此，這個賽道或是產業絕對是未來有大爆發和大未來的，不僅是在抗衰老上，在醫美整形的領域和美容保養品上，都是大家可期竹，僅以個人淺薄的知識介紹幹細胞的工藝，望各位專家和同道們不吝指教。


陳世棟 醫師
從事醫療工作多年，是義大利DEKA公司激光溶脂國際訓練講師及以色列ALMA（深藍）國際訓練講師，為中國整形美容外科學全書《微創美容外科學》編者之一，也是台灣美容醫學醫學會理事及美容外科教育長，長期從事醫學美容臨床及教學工作。本身有外科、內科及醫學工程專業背景，專研於先進的醫美技術開發，在激光溶脂、自體脂肪移植、幹細胞治療、端粒酶抗衰老治療及複合式無痕微整形等都有非常精湛的研究。

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